细胞培养基如何选择?

By 猪宝宝 at 10 天前 • 0人收藏 • 22人看过

  1. 液体培养基贮存于4 oC 冰箱,避免光照,实验进行前放在37 oC 水槽中温热. 2. 液体培养基(加血清) 存放期为六个月,期间glutamine 可能会分解,若细胞生长不佳,可以再添加适量glutamine. 3. 粉末培养基配制(以1 升为例): 3.1. 细胞培养基通常须添加10 % 血清,因此粉末培养基之配制体积为900 ml,pH 为 7.2 - 7.4.NaHCO3 为另外添加,若将NaHCO3 粉末直接加入液体培养基中会造成 pH 之误差,或局部过碱.因此粉末培养基及NaHCO3 粉末应分别溶解后才混合,细胞培养基过滤然后用CO2 气体调整pH,而非用强酸(HCl)或强碱(NaOH),因为氯离子对细胞生长可能有影响,且贮存时培养基的pH 易发生改变. 3.2. 材料: 3.2.1. 纯水(milli-Q 水或二次至三次蒸馏水,水品质非常重要) 3.2.2. 粉末培养基 3.2.3. NaHCO3 (Sigma S-4019) 3.2.4. 电磁搅拌器 3.2.5. 无菌血清瓶 3.2.6. 0.1 或0.2 mm无菌过滤膜 3.2.7. pH meter 3.2.8. 真空帮浦 3.2.9. CO2 气体 3.3. 步骤: 3.3.1. 取粉末培养基溶于700 ml milli-Q 水中,搅拌使其溶解. 3.3.2. 称取适量之NaHCO3 粉末(数量依培养基种类而异,表一)溶于200ml milli-Q 水中,搅拌使其溶解,然后通入CO2 气体至饱和,约3-5 分钟. 3.3.3. 将溶解且含饱和CO2 之NaHCO3 溶液加入溶解之液体培养基中混合.混后溶液之pH 应为7.2-7.4,除非pH 值偏差太大,否则不需用酸碱再调整之

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10 天前   #1

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